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                  正文
                ELISA試劑「盒常見一些問題
                文章來源:江蘇大发快三app下载有限公司   添加時間:2020/3/13 15:26:58 點擊率:5

                ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應用,但操作中的各個∩環節對試驗的檢測效果影響較大,如不註意,有可能導致顯色不全、花板等結果。現將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於下,以期給同行帶來一些啟發,提高試驗質量。下面分析ELISA試驗操作中可能影響↘結果的原因,並給出相應的解∏決辦法。
                一、選擇試劑
                    選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明㊣ 書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
                二、加樣
                可能原因:
                1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;

                2)手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱㊣ 前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);

                3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔╲外。
                解決辦法:
                1) 標本為血清:zui好將血液先自然存放1-2小時後,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的卐血液標本收集管,采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置※一段時間後,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置於-20℃的低溫冰箱▅內。

                 2) 加樣■後及時放入孵箱。

                 3) 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表面輕拭吸幹。

                 4) 如果采用AT或其他全自動加樣,zui好選擇FAME或其他後處理ω 儀器加酶試劑。

                 5) 標本較★多時,請分批操作。
                三、 孵育
                可能原因:
                1) 孵育〖時未貼封片或加■蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附於孔壁,難於〗清洗徹底;

                2) 孵々育時間人為延長,導致非特異性結合緊附於反應孔周圍,難以清洗◤徹底。
                解決辦法:
                1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
                四、洗板
                ELISA試劑盒可能ㄨ原因:
                1) 采用手工洗板,孔與孔之〇間液體交叉。

                2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不徹底①;洗板針堵塞↓,抽吸不完全;洗板不暢,導致洗板效果差。

                3) 反應板過多造成洗板『等待時間長。
                解決辦法:
                1) 保證洗液註◥滿各孔,洗板@ 針暢通,洗完板後zui好在吸水紙(選擇幹凈、無或少々塵的吸水材料)上輕輕拍幹;

                2) 合理安排,或多用幾臺洗板ㄨ機。
                五、顯色
                可能原因:
                1) 顯色劑配制後放置時間過長或使用過期顯色劑;

                2) 加顯色劑時濺出孔外造成液□體回流。
                解決辦法:

                1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過←期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色№劑不用;

                2) 加樣時保持顯色劑不外流;

                3) A、B液應避免接觸金屬器械。
                六、終止
                    可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性〖增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
                七、讀板
                    如讀板時板底不︻清潔等。應保證酶標板★清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢≡測標準自動化,有效提高檢測質量。
                    ELISA試劑盒在實際操作♂中,除◥了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步▂驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測◥質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對∮於實現ELISA標準化檢測♀、提高檢測質量起到了重要作用。

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